T_CSTM 00995-2024 T_CAIA SHO22-2024 人全血糖化血红蛋白HbA1C 含量基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法

ICS 11.020 CCS C 50 团 体 标 准 T/CSTM 00995—2024/T/CAIA SHO22—2024/(IDT) 人全血 糖化血红蛋白 HbA1C 含量 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法 Human whole blood — Content of glycosylated hemoglobin HbA1C — Matrix-assisted laser desorption ionization–time of flight mass spectrometry 2024-10-31 发布 2025-01-31 实施 中关村材料试验技术联盟 中国分析测试协会  发布 T/CSTM 00995—2024/T/CAIA SHO22—2024/(IDT) 前 言 本文件参照 GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》，GB/T 20001.4-2015《标准编写规则 第 4 部分：试验方法标准》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 T/CSTM 00995-2024 与 T/CAIA SHO22—2024 一致程度为等同（IDT）。 本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）和中国分析测 试协会共同提出。 本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验领域科学试验创新方法标准化技术委员会 （CSTM/FC98/TC02）和中国分析测试协会共同归口。 1 T/CSTM 00995—2024/T/CAIA SHO22—2024/(IDT) 引 言 HbA1C 占总糖化血红蛋白的 60%-85% ，是糖化血红蛋白的主要组成成分，系 2 型糖尿病的临床辅 助诊断及监测指标。HbA1C 由葡萄糖的游离醛基与血红蛋白的β链 N 末端缬氨酸的氨基经非酶促结合反 应，先形成不稳定的醛亚胺（Schiff 碱），然后经过葡糖胺重排，最后形成稳定的酮胺化合物。HbA1C 的含量主要取决于血糖浓度及血糖与血红蛋白的接触时间，可以反映采血前 120 天内的平均血糖水平， 个体内生物学变异小于 2%。 本文件规定的方法直接检测β珠蛋白及糖基化修饰β珠蛋白，无需蛋白内切酶 Glu-C 酶切等实验步 骤 。所测标志物与国际临床化学和实验室医学联盟（International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, IFCC）对糖化血红蛋白 HbA1C 含量检测的定义相同，并且能有效地区分和识别多 种血红蛋白变体。 2 T/CSTM 00995—2024/T/CAIA SHO22—2024/(IDT) 人全血 糖化血红蛋白 HbA1C 含量 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法 重要提示：使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本文件规定了利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测人全血糖化血红蛋白 HbA1C 含量的方 法，包括试剂配制、样品制备、仪器检测、数据分析等。 本文件适用于临床实验室及从事流行病学研究的实验室，对新鲜或冷冻人全血糖化血红蛋白 HbA1C 含量的检测（NGSP），线性范围为 3.45%~ 19.50% 。其他用途也可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6379. 1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第 1 部分：总则与定义 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第 2 部分：确定标准测量方法重现性 与再现性的基本方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20001.4 标准编写规则 第 4 部分：试验方法标准 GB/T 38576 人类血液样本采集与处理 JJF 1528 飞行时间质谱仪校准规范 WS/T 408 临床化学设备线性评价指南 WS/T 461 糖化血红蛋白检测 3 术语和定义 WS/T 408和WS/T 461界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 验证 verification 通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定。 注: 本文件中的验证主要是指分析系统的验证，即分析系统在实验室的性能是否与规定性能指标或生产厂商提供的 性能指标一致。 [来源：WS/T 461-2015 ，定义 3.2 ] 3.2 3 T/CSTM 00995—2024/T/CAIA SHO22—2024/(IDT) 糖化血红蛋白 hemoglobin A1C ；HbA1C 血液中葡萄糖与血红蛋白 1 个或 2 个β链 N 末端缬氨酸反应，发生不可逆糖基化所形成的稳定 化合，全称为：血红蛋白β链(血液)-N-(1-脱氧果糖-1-基)血红蛋白β链。 [来源：WS/T 461-2015 ，定义 3.3 ，有修改] 3.3 线性 linearity 在给定的测量范围内，使测定结果与分析物的量直接成比例的能力。 注：此处的测定结果指最终的分析结果，而非仪器输出的原始信号。 [来源：WS/T 408-2012 ，定义 2.2 ，有修改] 3.4 线性范围 linear range 使实验系统的最终分析结果为可接受的线性的浓度范围，此时非线性误差应低于允许误差。 [来源：WS/T 408-2012 ，定义 2.3 ] 4 方法概述 新鲜或冷冻的人全血样品经稀释液稀释后，红细胞破裂并释放出其中的血红蛋白分子，按一定比例 与芥子酸（sinapic acid ，SA)基质混和均匀后点在靶板上，干燥后加载到基质辅助激光解吸电离飞行时 间质谱仪（MALDI-TOFMS） 中进行检测（激光波长 349 nm）。采用外标法对样品中的糖化血红蛋白 HbA1C 含量进行定量。 5 试验条件 试验温度：20℃~25℃ 。 相对湿度:40%RH～60%RH。 6 试剂和材料 6.1 试剂 6.1.1 水：GB/T 6682 定义的实验室一级用水。 6.1.2 乙腈（ACN） ：色谱纯。 6.1.3 芥子酸（SA） ：纯度大于 99.0% ，适用于 MALDI 基质。 6.1.4 三氟乙酸（TFA） ：色谱纯。 6.1.5 糖化血红蛋白